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 <p class="f_center"><img src="http://dingyue.ws.126.net/2024/1030/12d4a999g00sm5xkc02nbd200qo006og00it004p.gif"/><br/></p><p id="34O9MQU9">在之前的中，物、化、生三大类转染方法的优缺点已进行总结归纳，下面是复习时间：</p><p class="f_center"><img src="https://nimg.ws.126.net/?url=http%3A%2F%2Fdingyue.ws.126.net%2F2024%2F1030%2Fcdee5786j00sm5xkd008ud200u0009sg00fd0050.jpg&thumbnail=660x&quality=80&type=jpg"/><br/></p><p class="f_center"><img src="https://nimg.ws.126.net/?url=http%3A%2F%2Fdingyue.ws.126.net%2F2024%2F1030%2F0a084949j00sm5xke008zd200u0008kg00fd004d.jpg&thumbnail=660x&quality=80&type=jpg"/><br/></p><p class="f_center"><img src="https://nimg.ws.126.net/?url=http%3A%2F%2Fdingyue.ws.126.net%2F2024%2F1030%2Faae2dd08j00sm5xkf00bhd200u000cgg00fd006d.jpg&thumbnail=660x&quality=80&type=jpg"/><br/></p><p id="34O9MQUL">▲ 点击可放大</p><p id="34O9MQUR">那么电穿孔，即我们常说的“电转”，是实验室中除了病毒转染、脂质体或PEI转染外使用较为普遍的一种物理转染方法。</p><p id="34O9MQUT">对于电转方法的使用，有人说它们能够<strong>高效转染难以转染的细胞如神经元、免疫、原代细胞等</strong>，同时在现阶段大热的应用中，如<strong>基因编辑、CRISPR筛选，甚至于近年来新型崛起的合成生物学和AI制药研发</strong>中，都常能看到电转技术的应用。</p><p id="34O9MQUV">而作为获得今年生物技术领域全球第四大的私募融资的实体瘤CAR-T明星公司Arsenal Biosciences，也是采用了<strong>非病毒载体的基因编辑CITE技术(CRISPR Integration of Transgenes by Electroporation)</strong>，即<strong>用电穿孔手段实现T细胞的转基因CRISPR整合技术</strong>，使T细胞有选择性地靶向肿瘤，从而使患者的免疫系统能够在不破坏正常组织的情况下摧毁ccRCC细胞(clear-cell renal cell carcinoma)。</p><p id="34O9MQV5">那么如何在实验中提高电转效率，想必是大家最关心的问题，今天小编请到了电转技术大户Lonza的专家为大家总结了以下八点：</p><p id="34O9MQV8">1.准备好加了新鲜培养基的多孔板，并在实验前于37°C下<strong>预平衡</strong></p><p id="34O9MQV9">2.使用<strong>传代次数少</strong>并具有<strong>推荐融合度</strong>或密度（对数生长期）的细胞</p><p id="34O9MQVA">3.针对于<strong>贴壁细胞</strong>，需限制<strong>胰蛋白酶</strong>暴露时间，仔细监测细胞分离情况</p><p id="34O9MQVB">4.根据优化方案进行细胞计数并使用适量细胞数；所用<strong>细胞过少</strong>可能导致细胞死亡率增加，所用<strong>细胞过多</strong>可能导致细胞电转效率降低</p><p id="34O9MQVC">5.采用高质量DNA，使用<strong>内毒素去除</strong>试剂盒进行纯化；请通过测定A260:A280比值检查各质粒制备液的纯度</p><p id="34O9MQVD">6.室温下以离心速度<strong>80-100×g</strong>和方案<strong>规定的时间</strong>进行离心</p><p id="34O9MQVE">7.离心后加入Nucleofector™溶液，混匀溶液/细胞沉淀制备成单细胞悬液，<strong>避免对细胞沉淀进行额外操作或用移液器枪头重复抽吸</strong></p><p id="34O9MQVF">8.Nucleofection™核转后，用核转试剂盒内配的一次性移液管在电转耗材中的细胞顶部加入<strong>约500μL预热培养基</strong></p><p id="34O9MQVL"><strong>轻轻</strong>将一次性移液管吸头置于电转耗材底部，收集细胞</p><p id="34O9MQVR">将细胞悬液<strong>轻轻</strong>接种至制备的多孔板中</p><p id="34O9MR01"><strong>请勿重复吹吸</strong>混合细胞</p><p id="34O9MR04">希望以上精心提炼的小技巧能帮助到各位的日常实验。</p><p id="34O9MR0A">提到Lonza知名的NucleofectorTM核转系统，大家应该早已不陌生。使用范围之广，在Google Scholar用“Nucleofector”来检索，已经有42,100+篇文献提及Nucleofector™技术，数量每日递增中。</p><p id="34O9MR0B">而Lonza 4D NucleofectorTM平台从实际需求出发，开发了从<strong>低通量到高通量，小体积到大体积</strong>的电转染，<strong>研发到生产</strong><strong>规模</strong>的设备型号，保证从小体系筛选到大规模电转的可行性和放大工艺可转移。包括如下功能模块并匹配对应应用方向：</p><p class="f_center"><img src="https://nimg.ws.126.net/?url=http%3A%2F%2Fdingyue.ws.126.net%2F2024%2F1030%2Fc7bccf65j00sm5xkg0032d200u000mxg00hn00dh.jpg&thumbnail=660x&quality=80&type=jpg"/><br/></p><p id="34O9MR0H">并且<strong>只需5步简单的操作方案</strong>，</p><p id="34O9MR0I"><strong>即可实现轻松电转</strong>！</p><p class="f_center"><img src="https://nimg.ws.126.net/?url=http%3A%2F%2Fdingyue.ws.126.net%2F2024%2F1030%2Fcaj00sm5xkh0031d200u000q3g00hn00fc.jpg&thumbnail=660x&quality=80&type=jpg"/><br/></p><p id="34O9MR0R">观看视频更直观！</p><p class="f_center"><img src="http://dingyue.ws.126.net/2024/1030/12d4a999g00sm5xkc02nbd200qo006og00it004p.gif"/><br/></p><p id="34O9MR11">互动有礼</p><p id="34O9MR14">在评论区说出你使用NucleofectorTM转染过哪些细胞，或谈谈你的使用心得，我们将在下周三前挑选5名留言赠送<strong>Lonza定制雨伞一把</strong>（颜色随机）！</p><p class="f_center"><img src="https://nimg.ws.126.net/?url=http%3A%2F%2Fdingyue.ws.126.net%2F2024%2F1030%2Ffaa2cfc8j00sm5xkl003ad200u000n1g00d400a2.jpg&thumbnail=660x&quality=80&type=jpg"/><br/></p><p id="34O9MR1A">想要了解更多NucleofectorTM相关信息？扫码获取产品手册。</p>