
MRGPRX2-HEK293细胞膜的制备
MRGPRX2-HEK293细胞于37℃、5%CO2及饱和湿度条件下,培养于含10%的胎牛血清、10 U·mL-1青霉素、10 U·mL-1链霉素的DMEM培养基中,至细胞生长至约80%时,用0.25%胰蛋白酶消化液进行消化,并用少量DMEM培养基制成单细胞悬液,计数,使细胞总量不低于1×107个。将细胞悬液于1100 g离心10 min,倾出上清液,用低渗液混悬沉淀,并超声破膜30 min后匀浆;混悬液经1000 g离心10 min,取上清液,在4℃下,12000 g离心20 min,弃上清液,加入10 mL低渗液将沉淀重悬,再次12000 g 离心。取细胞膜沉淀,加入5 mL 预冷的生理盐水重悬,得到细胞膜悬液,备用。

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